在選擇凝膠成像系統(tǒng)時(shí),我們關(guān)注的問題通常有以下一些方面:
1、為什么需要制冷CCD,它適用于哪些情況?在曝光超過5-10秒時(shí),CCD芯片就會(huì)發(fā)熱,沒有致冷設(shè)備的芯片,“熱”或者白的像素點(diǎn)就會(huì)遮蓋圖像,圖像到處可見雪花。在相同滿井電子的CCD情況下,降低CCD噪音,就能提高CCD的監(jiān)測能力,熱或者暗電流對(duì)于CCD都是噪音,噪音在制冷 CCD中基本都可以被深度致冷的Peltier消除。 CCD結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)、數(shù)字化的方法等都會(huì)影響噪音的產(chǎn)生。當(dāng)然通過改善結(jié)構(gòu)、優(yōu)化方法,同樣能減少噪音的產(chǎn)生。制冷CCD的適用性:熒光及化學(xué)發(fā)光本身較弱,所以對(duì)CCD噪音的降低要求很高,應(yīng)選用高分辨率數(shù)字冷卻CCD相機(jī)結(jié)合高通透鏡頭系統(tǒng),使其能夠捕獲到信號(hào)極其微弱的熒光及化學(xué)發(fā)光樣品圖像,并且能夠zui大程度的降低噪音,減少背景,提供出色的圖像清晰度。另外可選激發(fā)光源及多位濾鏡輪擴(kuò)大了熒光/化學(xué)發(fā)光成像的應(yīng)用范圍。所以一般在熒光及化學(xué)發(fā)光觀察時(shí)需要選擇制冷CCD。所以制冷CCD相機(jī)是分子影像成像分析系統(tǒng)的未來的發(fā)展趨勢和必須要求。
2、什么是信噪比和暗電流,它與CCD有什么關(guān)系?提到制冷CCD ,我們就必須提到另外一個(gè)參數(shù)就是信噪比, 圖象的信噪比應(yīng)該等于信號(hào)與噪聲的功率譜之比;說到信噪比就不得不提到暗電流了,因?yàn)榘惦娏魇菍?dǎo)致CCD噪音的很重要的因素。暗電流指在沒有曝光的情況下,在一定的時(shí)間內(nèi),CCD傳感器中像素產(chǎn)生的電荷。我們?cè)谧龌瘜W(xué)發(fā)光檢測的時(shí)候,需要的曝光的時(shí)候比較長,這樣導(dǎo)致CCD產(chǎn)生較多的暗電流,對(duì)圖像的質(zhì)量影響非常大。通常情況下,通過降低CCD的溫度來zui大限度的減少暗電流對(duì)成像的影響。CCD產(chǎn)生的暗電流隨著溫度下降而減少,但是在-23℃下曲線開始趨于平緩,由此可以看出溫度并非需要無休止的降低的。所以在選擇冷CCD時(shí),溫度在-25℃(溫度,非室溫以下)下一般就可以達(dá)到您的要求了。有的CCD是在圖像zui終生成后,通過軟件去背景來扣除暗電流,對(duì)于信號(hào)遠(yuǎn)遠(yuǎn)強(qiáng)于背景的有一定效果,但是對(duì)于弱信號(hào)處理過程中會(huì)產(chǎn)生越來越多的錯(cuò)誤。
3、什么是量子效率? CCD的量子效率也稱像素靈敏度,指在一定的曝光量下,像素勢阱中所積累的電荷數(shù)與入射到像素表面上的光子數(shù)之比。不同結(jié)構(gòu)的CCD其量子效率差異很大。值得注意的是CCD 的量子效率與入射光的波長有關(guān)。動(dòng)態(tài)范圍的值越高CCD性能越好.
4、如何選擇光學(xué)鏡頭?光學(xué)鏡頭是機(jī)器視覺系統(tǒng)中*的部件,直接影響成像質(zhì)量的優(yōu)劣,影響算法的實(shí)現(xiàn)和效果。光學(xué)鏡頭規(guī)格繁多,有時(shí)不免頭暈。光學(xué)鏡頭從焦距上可分為短焦鏡頭、中焦鏡頭,長焦鏡頭;從視場大小分有廣角、標(biāo)準(zhǔn),遠(yuǎn)攝鏡頭;結(jié)構(gòu)上分有固定光圈定焦鏡頭,手動(dòng)光圈定焦鏡頭,自動(dòng)光圈定焦鏡頭,手動(dòng)變焦鏡頭、自動(dòng)變焦鏡頭,自動(dòng)光圈電動(dòng)變焦鏡頭,電動(dòng)三可變(光圈、焦距、聚焦均可變)鏡頭等。
5、常用的數(shù)據(jù)傳輸?shù)姆绞绞鞘裁? IEEE1394總線是一種目前為止zui快的高速串行總線,火線(IEEE1394)支持的傳輸速率有100Mbps,200Mbps,400Mbps,zui高的傳輸速度為400Mbps/s。對(duì)于各種需要大量帶寬的設(shè)備提供了專門的優(yōu)化,接口可以同時(shí)連接63個(gè)不同設(shè)備,IEEE1394同USB一樣,支持帶電插撥設(shè)備。IEEE1394同樣支持即插即用,現(xiàn)在的WIN98 SE、WIN2000、WIN ME、WIN XP都對(duì)IEEE1394支持的很好,在這些操作系統(tǒng)中用戶不用再安裝驅(qū)動(dòng)程序,也能使用IEEE1394設(shè)備。1.軟件功能包括哪幾個(gè)方面?選擇好成像系統(tǒng)后,配套的軟件選擇也很重要。硬件設(shè)備再好,如果不配上好的軟件,也無法發(fā)揮它應(yīng)有的功能。作為凝膠成像系統(tǒng)軟件功能和用途都基本相似,這里我們介紹一下zui關(guān)注的幾個(gè)特點(diǎn): A、軟件的基本功能:可對(duì)不同樣品,如條帶,斑點(diǎn),細(xì)菌克隆,芯片,細(xì)胞或者活體動(dòng)物等,進(jìn)行定性、定量分析,加批注,輸出圖像等操作。 B、圖像采集方式:對(duì)于化學(xué)發(fā)光或多色熒光產(chǎn)品,軟件應(yīng)具備電影模式,可以進(jìn)行圖像多禎累計(jì)功能來增強(qiáng)線性動(dòng)態(tài)范圍和數(shù)據(jù)準(zhǔn)確度。 C、操作簡便,軟件應(yīng)具備操作輔助工具,使軟件操作更簡單易用。采用三步式泳道及條帶分析,可以快速計(jì)算蛋白質(zhì)和核酸的分子量及含量。 D、數(shù)據(jù)庫功能也是*的,這樣可以檢索、分類或比較所有生成的圖像??衫貌煌娘@示算法程序圖像化顯示條帶差異。 E、曝光方式:應(yīng)采用單一曝光、多重曝光,累計(jì)曝光,延時(shí)(定時(shí))曝光多種模式可選。 F、記憶功能:軟件能記憶并自動(dòng)調(diào)用成像數(shù)據(jù),這樣你不用每次設(shè)置就能獲得重復(fù)性好的結(jié)果。 G、軟件應(yīng)配備兩套以上,使用單機(jī)版,多用戶版或網(wǎng)絡(luò)版,用戶可彼此獨(dú)立操作,互不干擾,互不混淆。
6、為何要采用自動(dòng)變焦鏡頭,有何意義?自動(dòng)變焦鏡頭無需手動(dòng)調(diào)節(jié),可操作性強(qiáng),同時(shí)也減少了EB潛在的污染機(jī)會(huì)。再者使得將CCD內(nèi)置成為了可能,從而達(dá)到防灰防塵防震的目的,更好地保護(hù)了核心部件延長產(chǎn)品的使用壽命。
7、紫外對(duì)人體有傷害,是否具有防護(hù)措施?紫外對(duì)人體,特別是眼睛有一定傷害,TOCAN凝膠成像系統(tǒng)具備紫外防護(hù)設(shè)施,在紫外燈開啟的狀態(tài)下,如不慎打開暗箱,紫外燈會(huì)自動(dòng)熄滅防止對(duì)人體的傷害。
8、能否在凝膠成像上直接切膠? TOCAN凝膠成像可以,如需直接切膠,首先按系統(tǒng)中間的觀察窗,打開裝有進(jìn)口防紫外玻璃的觀察窗口,然后打開左右兩側(cè)專為割膠所設(shè)計(jì)的小門,即可進(jìn)行切膠操作。
9、如何調(diào)節(jié)焦距,聚焦,光圈以獲得高質(zhì)量的圖片?三個(gè)zui重要的可調(diào)參數(shù)分別是焦距,聚焦和光圈。其中焦距調(diào)節(jié)清晰度,聚焦調(diào)節(jié)圖像大小,光圈調(diào)節(jié)明暗。一般先把光圈調(diào)節(jié)到適宜的亮度后,再調(diào)節(jié)聚焦將圖像放到zui大,zui后調(diào)解焦距,在圖像較大的情況下焦距比較容易調(diào)節(jié)到zui清晰狀態(tài),然后再把圖像縮放在適宜大小后成像即可。